导读：优选天麻的炮制工艺及其标准饮片的均匀化工艺，分析影响炮制和均匀化工艺的因素，在此基础上设计正交试验，分别以天麻素和对羟基苯甲醇总含量及总多糖含量、天麻素和对羟基苯甲醇总含量及出粉率为指标，综合优选出最佳炮制工艺和均匀化工艺。最佳润切工艺为：浸泡54h，闷润22h，切片后于60℃烘干；最佳蒸切工艺为：浸泡3h，蒸制3h，切片后于40℃烘干；最佳均匀化工艺：单次粉碎时间为15s，粉碎3次，投料量占粉碎机总体积的3/4。通过验证实验证明优选出的最佳工艺稳定、合理、可行，可为天麻饮片的规范化研究提供参考。
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高笑笑,李霞,苗静,宋嬿,张玉莲,吕婷婷,高文远.天麻炮制及其标准饮片的均匀化工艺研究[J].天津中医药大学学报,,37(6):-.
GAOXiaoxiao,LIXia,MIAOJing,SONGYan,ZHANGYulian,LVTingting,GAOWenyuan.StudyonprocessingtechnologyofGastrodiaelataBlandhomogenizationtechnologyofitsstandardpieces[J].JournalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,,37(6):-.
天麻炮制及其标准饮片
的均匀化工艺研究
高笑笑,李霞,苗静,宋嬿,张玉莲,吕婷婷,高文远
天麻饮片一般是由兰科植物天麻（GastrodiaelataBl.）的干燥块茎经润切或蒸切两种炮制工艺得到。其主要成分有天麻素，对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛和腺苷等。目前已有学者对何首乌、制何首乌、槟榔、厚朴、姜厚朴、白附子、丹参、酒丹参等多种饮片进行了均匀化研究，为中药饮片的质量标准研究奠定了基础。笔者对润切和蒸切两种炮制工艺进行优化，得到了最佳炮制工艺参数。采用正交试验设计结合综合评分优选出天麻标准饮片的最佳均匀化工艺。为天麻饮片的质量控制的提升以及天麻标准饮片的进一步研究提供参考依据。
1仪器与试药1.1仪器
岛津LC-高效液相色谱仪，KH-B型数控超声波清洗器（昆山市禾创超声仪器有限公司），CPD型Sartorius分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），LG-04型四两装高速中药粉碎机（瑞安市百信药机器械厂），RE-A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪仪器厂），Milli-Q超纯水系统（Millipore，Bedford，MA，USA），各种规格筛子。
1.2试药
天麻药材由上海上药华宇药业有限公司提供，均匀化用天麻饮片由天津市中药饮片厂有限公司提供（产地：安徽，批号：G-01），经过天津大学药学院高文远教授鉴定为兰科植物天麻（GastrodiaelataB1.）的干燥块茎。D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，-，99.5%），天麻素对照品（中国食品药品检定研究院，-，96.8%），对羟基苯甲醇对照品（天津士兰科技有限公司，PCM-DQJ-，98%）。乙腈为色谱纯，磷酸、乙醇、苯酚及浓硫酸均为分析纯，水为超纯水。
2方法与结果2.1天麻饮片蒸切工艺2.1.1生产工艺流程
原药材→除杂洗净→蒸透→切薄片→干燥。以天麻素、对羟基苯甲醇、总多糖含量为指标，考察浸泡时间、蒸制时间、干燥温度对天麻的影响，优选出最佳炮制工艺。见表1。
表1炮制工艺考察因素
2.1.2天麻蒸切饮片质量评价2.1.2.1天麻素、对羟基苯甲醇含量测定
参照版《中国药典》天麻项下天麻素和对羟基苯甲醇总含量测定方法。
2.1.2.2总多糖含量测定
对照品的制备：精密称取℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖.0mg，置50mL容量瓶中加蒸馏水至刻度，浓度2.06mg/mL。
标准曲线的制备：精密吸取标准溶液20，30，40，50，60μL分别置于具塞试管中各加蒸馏水使体积为1.0mL，再分别加入5%苯酚试液1.5mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置10min，置沸水浴中15min，取出，流水冷却至室温，另以蒸馏水1mL，加苯酚和浓硫酸同上操作为空白试液，于nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
天麻多糖的提取：分别精密称取天麻饮片粉末0.3g，置于烧瓶中加95%乙醇mL，回流1h，趁热过滤，残渣用95%热乙醇洗涤3次，残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水mL，加热提取2h，趁热过滤，残渣用热水洗涤3次，洗涤液并入滤液中，放冷后移入mL量瓶，加水至刻度作为天麻多糖提取液，备用。
天麻多糖含量测定：分别精密吸取上述天麻多糖的提取液0.2mL，置具塞试管中加蒸馏水至1.0mL，摇匀，分别加入苯酚溶液1.5mL，摇匀后迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置10min，置沸水浴中加热15min，取出，每种方法提取液平行3次显色，分光光度法于nm处测定吸光度，按照标准曲线计算总多糖含量。
2.1.2.3测定结果
以天麻素、对羟基苯甲醇总含量为指标，各因素对其影响大小为：干燥温度蒸制时间浸泡时间，最佳炮制工艺为A1B2C2，即浸泡0h，蒸制2.5h，切片后于60℃烘干；以总多糖含量为指标，各因素对其影响大小为：浸泡时间蒸制时间干燥温度，最佳炮制工艺为A2B3C1，即浸泡3h，蒸制3h，切片后于40℃烘干；以综合评价指标（0.5×天麻素对羟基苯甲醇总含量+0.5×总多糖含量）为指标，各因素对其影响大小为：浸泡时间蒸制时间干燥温度，最佳炮制工艺为A2B3C1，即浸泡3h，蒸制3h，切片后于40℃烘干。结果见表2。
表2天麻饮片蒸切工艺考察
2.1.3验证试验
按照最佳炮制工艺，制备3批天麻饮片，测定天麻素、对羟基苯甲醇总含量和总多糖含量。验证实验结果表明，优选的炮制工艺稳定、可行。因此，天麻蒸切工艺的最佳炮制工艺为：取天麻药材，浸泡3h，蒸制3h，切片后于40℃烘干。结果见表3。
表3最佳炮制工艺验证结果
2.2天麻饮片润切工艺2.2.1生产工艺流程
原药材→除杂洗净→浸泡→润透→切薄片→干燥。以天麻素、对羟基苯甲醇、总多糖含量为指标，考察浸泡时间、闷润时间、干燥温度对天麻的影响，优选出最佳炮制工艺。见表4。
表4炮制工艺考察因素
表选项
2.2.2天麻润切饮片质量评价2.2.2.1天麻素、对羟基苯甲醇含量测定
同“2.1.2.1”部分。
2.2.2.2总多糖含量测定
同“2.1.2.2”部分。
2.2.2.3测定结果
以天麻素、对羟基苯甲醇总含量为指标，各因素对其影响大小为：浸泡时间闷润时间干燥温度，最佳炮制工艺为A3B1C2，即浸泡60h，闷润10h，切片后于60℃烘干；以总多糖含量为指标，各因素对其影响大小为：干燥温度浸泡时间闷润时间，最佳炮制工艺为A2B3C2，即浸泡54h，闷润22h，切片后于60℃烘干；以综合评价指标（0.5×天麻素对羟基苯甲醇总含量+0.5×总多糖含量）为指标，各因素对其影响大小为：干燥温度浸泡时间闷润时间，最佳炮制工艺为A2B3C2，即浸泡54h，闷润22h，切片后于60℃烘干。结果见表5。
表5天麻饮片润切工艺考察
2.2.3验证实验测定结果
按照最佳炮制工艺，制备3批天麻饮片，测定天麻素、对羟基苯甲醇总含量和总多糖含量。验证实验结果表明，优选的炮制工艺稳定、可行。因此，天麻润切工艺的最佳炮制工艺为：取天麻药材，浸泡54h，闷润22h，切片后于60℃烘干。结果见表6。
表6最佳炮制工艺验证结果
2.3均匀化工艺研究2.3.1最佳粒度筛选
称取均匀化用天麻饮片适量，粉碎，制备不同粒度的标准饮片，采用版《中国药典》中天麻项下含量测定方法测定其中的天麻素和对羟基苯甲醇总含量。结果显示，能通过24目筛的粉末所含的天麻素和对羟基苯甲醇总含量相差不大，故筛选出的可作为最佳粒度的天麻标准饮片即为能通过2号筛（24目）的粉末。结果见表7。
表7不同粒度天麻标准饮片中天麻素和对羟基苯甲醇总含量测定
2.3.2因素与水平的确定
称取天麻饮片适量，用粉碎机进行粉碎，根据最佳粒度筛选结果，以粉碎时间（A）、粉碎次数（B）和投料量（C）为考察因素，选用L9（34）正交设计表。见表8。
表8均匀化工艺的因素水平表
2.3.3正交试验及结果2.3.3.1天麻素和对羟基苯甲醇总含量测定
参照版《中国药典》天麻项下天麻素和对羟基苯甲醇总含量测定方法，分别对制得的9个粉末进行含量测定。测定结果见表9。
表9正交试验设计与结果
2.3.3.2出粉率计算
称取相应质量的天麻饮片，按照正交试验设计方案进行粉碎，将所得粉末过2号筛（24目），可通过的粉末置于一边，未能通过筛网的粉末则返回粉碎机内再次粉碎，试验结束后合并，称量通过2号筛粉末的总重量，记为出粉量，计算出粉率。出粉率=出粉量/天麻饮片量×%。结果见表9。
2.3.3.3综合指标评价
由结果可知，各因素对出粉率的影响为BAC，即粉碎次数投料量单次粉碎时间；各因素对天麻素和对羟基苯甲醇总含量的影响为CAB，即投料量单次粉碎时间粉碎次数。以综合评价指标进行评价，各因素对其影响为BAC，即粉碎次数投料量单次粉碎时间，故最佳均匀化制备工艺为A3B3C3，即单次粉碎时间15s，粉碎3次，投料量为粉碎机总体积的3/4。结果见表9。
2.3.4验证试验
按上述最佳均匀化制备工艺进行验证，平行实验3次，分别测定出粉率、天麻素和对羟基苯甲醇总含量。验证结果显示，由最佳均匀化制备工艺制备的天麻标准饮片，各指标测定值稳定，RSD值均小于2%，验证了正交试验结果的准确性及所选工艺参数的合理性，表明该均匀化制备工艺稳定可行。见表10。
表10最佳粉碎工艺验证结果
3讨论
年版《中国药典》中虽记载了各种中药饮片的炮制方法，却没有明确的工艺参数，例如温度，时间等均会影响到饮片的外观和内在品质。殷放宙等研究了不同炮制温度及时间对栀子和山楂颜色值的影响，结果发现栀子中火及武火炒制的时间为7min，炒山楂需文火炒制5min，焦山楂需中火炒制6min，山楂炭需武火炒制8min可达到炮制所需的颜色要求。张影月等考察了研究不同炮制时间对杜仲中4个指标成分在大鼠体内药代动力学行为的影响，结果显示炮制2h杜仲中的主要成分相对于其他炮制时间杜仲在大鼠体内的吸收量有所提高，故杜仲炮制时间宜控制在2h较为合理。本文考察了浸泡时间，闷润/蒸制时间以及干燥温度对天麻饮片的影响，优化了炮制工艺，明确了两种炮制工艺的参数。两种炮制方法进行比较，发现两种工艺的总多糖含量相差不大，蒸切工艺中天麻素和对羟基苯甲醇的总含量明显高于润切工艺，可能与闷润过程中有效成分在水中流失有关。
粉碎粒度对有效成分的溶出具有一定的影响。丁苗苗等人对西洋参的超微粉和粗粉中人参皂苷Re、Rb1的溶出度进行研究，结果发现超微粉中人参皂苷Rb1的累积溶出度高于粗粉，人参皂苷Re的累积溶出度无显著性差异。笔者考察了不同粒度的天麻标准饮片，通过测定天麻素和对羟基苯甲醇的总含量，筛选出了最佳粒度的天麻标准饮片，保证了有效成分的含量。
出粉率反映了均匀化方法的粉碎效率，正交设计中的3个考察因素均会对其产生影响。中药标准物质不能工业化批量生产，存在供应不足的问题。出粉率可作为均匀化制备工艺的一个重要指标，以避免中药标准饮片此后作为标准物质可能出现的供应不足问题。本研究采用正交设计结合综合评分法优选出最佳均匀化工艺，与单一指标评定饮片质量相比，优选出的天麻标准饮片均匀化方法更为合理和全面。
中药饮片的成分复杂，无规范化标准，大多数饮片多参考其药材标准来控制质量，中药标准饮片是衡量中药饮片质量最合适的标准物质。本研究为天麻饮片的质量控制提供一种新的更具专属性、科学性的标准物质，可为中药标准饮片的均匀化研究提供参考，进一步提高中药饮片质量控制技术水平。
作者单位：天津大学药物科学与技术学院（高笑笑,李霞,苗静,高文远）上海上药华宇药业有限公司科研管理部（宋嬿,张玉莲,吕婷婷）
基金项目：国家发展改革委、中医药管理局中药标准化项目（ZYBZH-Y-SH-38）;科技部基础性工作专项（FY111）。
作者简介:高笑笑(-),女,硕士研究生,研究方向为生药学。
通讯作者:李霞;高文远。
